2019高考生物大二轮复习专题十六基因工程和细胞工程学案(5)

(3)将(1)中的重组质粒导入(2)中的转基因宿主细胞，宿主细胞内由于没有Uaa，翻译将会在终止密码子处停止，将不能翻译出改造病毒基因的完整蛋白，所以要想翻译出完整蛋白，需要在培养基中加入Uaa。转录时，识别启动子的酶为RNA聚合酶，因为转录在宿主细胞中进行，所以转录用的酶为宿主细胞的RNA聚合酶。

(4)不具有感染性的灭活病毒不能进入人体细胞内，只会引发体液免疫，而减毒的活疫苗虽然不能在人体细胞内正常增殖，但可以侵入人体细胞，能引起人体产生细胞免疫，增强免疫保护效果。

8．(2018·江苏卷)为生产具有特定性能的α－淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α－淀粉酶基因(1656个碱基对)，利用基因工程大量制备α－淀粉酶，实验流程见下图。请回答下列问题：

(1)利用PCR技术扩增α－淀粉酶基因前，需先获得细菌的__基因组DNA__。 (2)为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的__5′__端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是__使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连__。

(3)进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中__②__的设定与引物有关，__⑥__的设定与扩增片段的长度有关。(填序号)

①变性温度 ②退火温度 ③延伸温度 ④变性时间 ⑤退火时间 ⑥延伸时间 (4)下图表示筛选获得的工程菌中编码α－淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：

图中虚线框内mRNA片段包含__8__个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有__13__种。

(5)获得工程菌表达的α－淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性，结果如下： 缓冲液 pH 酶相对活性%

50 mmol/L Na2HPO4－KH2PO4 6.0 6.5 7.0 7.5 7.5 8.0 50 mmol/L Tris－HCl 8.5 9.0 9.0 50mmol/L Gly－NaOH 9.5 10.0 10.5 25.4 40.2 49.8 63.2 70.1 95.5 99.5 85.3 68.1 63.7 41.5 20.8

根据上述实验结果，初步判断该α－淀粉酶活性最高的条件为__pH为8.5，缓冲液为50_mmol/LTris－HCl__。

[解析] (1)利用PCR技术扩增α－淀粉酶基因前，需先获得细菌的基因组DNA作为模板，并依据α－淀粉酶基因两端的部分核苷酸序列合成两条引物。

(2)利用PCR技术扩增DNA时，只能从3′端延伸DNA子链，为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的5′端加上限制性酶切位点，并且要注意在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，这样既能防止目的基因、载体的自身连接，又能确保目的基因与表达载体的定向连接。

(3)PCR技术包括变性、退火(复性)和延伸三步，变性温度决定PCR反应中双链DNA的解链，且时间很短；退火时引物结合到互补的DNA单链上，退火温度由引物复性温度决定，其温度设定与引物的长度、碱基组成及其浓度等有关；延伸时间与产物片段的长度有关，产物在1kb以内的延伸时间为1min左右，3～4kb的延伸时间为3～4min。

(4)图中虚线框内共含有24个碱基，mRNA上3个相邻的碱基编码1个氨基酸，故共包含8个密码子。虚线框后的第1个密码子的第1个碱基是U，第2和第3个碱基各有4种可能性，因此共16种可能性。题干表明控制α－淀粉酶的基因有1656个碱基对，说明图中虚线框后的第一个密码子肯定不是终止密码子(3种终止密码子为UAA、UAG、UGA)，故虚线框后第一个密码子实际最多有16－3＝13种可能性。

(5)分析表格中的数据，酶相对活性最高为99.5%，对应的条件是pH为8.5，缓冲液为50mmol/LTris－HCl。

百度搜索“yundocx”或“云文档网”即可找到本站免费阅读全部范文。收藏本站方便下次阅读，云文档网，提供经典综合文库2019高考生物大二轮复习专题十六基因工程和细胞工程学案(5)在线全文阅读。