夜香树花提取物体外抗肿瘤作用的实验研究

                  作者：卢红梅，钟振国，赵世元，吕金燕

【摘要】  目的探讨夜香树花提取物对体外培养的肿瘤细胞株生长抑制的影响。方法按极性递增原则回流提取得到夜香树花提取物总浸膏和正丁醇部位，再采用MTT法和集落形成法观察夜香树花提取物总浸膏和正丁醇部位对人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404、宫颈癌细胞株Hela的生长抑制情况。结果当夜香树花总浸膏浓度为40μg/ml及正丁醇部位提取物浓度为20 μg/ml时对3种肿瘤细胞株的生长抑制率为48.10%～68.97%。结论 夜香树花提取物在体外具有明显抗肿瘤作用。

【关键词】  夜香树花; 总浸膏; 正丁醇部位; MTT法; 集落形成法

夜香树(Cestrum nocturnum Linn，CN)，为茄科夜香树属植物，其花色黄绿或洁白，白昼闭合无香气，夜晚开放且香气浓郁，香味可驱蚊。对CN叶进行体外抗肿瘤实验研究结果表明，CN叶提取物具有抗肿瘤作用，并且证明了有效成分主要集中在正丁醇部位[1]。为了探讨其花是否也具有抗癌作用，本实验对CN花提取物进行体外抗肿瘤研究。现将研究结果报道如下。

　　1 材料与仪器

　　1.1 药物CN花采自广西境内，经本学院药用植物教研室刘寿养教授鉴定为茄科属植物夜香树(Cestrum nocturnum Linn.);长春新碱(陕西博森生物制药，批号：20050917)。

　　1.2 肿瘤细胞株 人胃癌细胞株SGC7901和宫颈癌细胞株Hela购自上海细胞生物研究所细胞库，人肝癌细胞株Hele7404由广西医科大学药理教研室提供。

　　1.3 试剂MTT(四甲基噻唑蓝)德国Sigma公司产品，批号：050609;FBS(胚胎牛血清)杭州四季青生物工程材料有限公司产品，批号：060226;RPMI1640培养基，美国GIBCO公司产品，批号：1120708;Trypsin(胰蛋白酶)天津市景洋生物制品有限责任公司产品，批号：00503;DMSO(二甲基亚砜)上海润捷化学试剂有限公司产品，批号：20051026。

　　1.4 仪器CO2培养箱(ThermO Forma)美国产;倒置显微镜(Olympus)，日本产;酶标仪(Biocell)，奥地利产;培养瓶(美国Promega Corporation产);96孔板(德国产，型号：3679);培养皿(美国产，型号：3001);微量加样器(日本产，型号：Nichipet)。

　　2 方法

　　2.1 提取物的制备[2]CN花晒干后，用乙醇提取浓缩得总浸膏后再用正丁醇回流提取，得到正丁醇部位。

　　2.2 MTT法测定[3，4]取对数生长期的肿瘤细胞，用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调配成浓度为5 000个/ml，接种于96孔板，每孔加入200 μl，其中包括190 μl肿瘤细胞悬浮液和10 μl药液，试药按浓度递增原则各设5个不同的浓度，终浓度分别为5，10，20，40，80 μg/ml，每种药的每种浓度均设3个平行孔，空白阴性对照组为等容积的RPMI-1640培养基。在37℃、10%CO2条件下培养3 d。弃去上清液后，每孔加入200 μl浓度为0.2 mg/ml的MTT溶液(用1640培养基配制)，振荡混匀后继续培养4 h。再弃去上清液，每孔加入200 μl DMSO溶液，轻轻振荡使MTT甲臜沉淀溶解，用酶标仪(波长为550 nm，参比波长为450 nm)测定其OD值，计算抑制率，求IC50。按下列公式计算药物对肿瘤细胞增殖的抑制率。

　　抑瘤率(%)=(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100﹪

　　2.3 集落形成法[3，5]取对数生长期的肿瘤细胞，用0.5 ml、0.25%的胰蛋白酶消化，细胞计数后用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调配成浓度200个/ ml，接种于24孔板，每孔加入1 ml，其中包括950μl肿瘤细胞悬浮液和50 μl药液，药物的最终浓度为10 μg/ml，每种药每种浓度设4个平行孔，阴性对照组加入950 μl肿瘤细胞悬浮液和50 μl RPMI-1640培养基，摇匀后置37℃、10%CO2培养7d。弃去上清液，用瑞氏染液染色5 min，然后用Giemsa's溶液与Sorensen磷钼酸缓冲液以1∶9混合，染色10 min。流水冲洗、凉干，在20×的显微镜下计数含50个细胞以上的集落，重复3次。按下式计算集落形成率及抑制率。

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