《动物生化实验》实验四、牛乳中蛋白质的提取与鉴定

牛乳蛋白质的 提取与鉴定

一、实验目的： 了解蛋白质的化学性质； 掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。

二、实验原理： 牛乳中含丰富的蛋白质(水分87.8%、脂 肪3.5%、蛋白质3.1%、乳糖4.9%、灰分 0.7%、能量29.kg/100kg),其中主要是

酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量的5/6。

1、酪蛋白提取的原理 蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质，在某 一pH值溶液中，蛋白质分子所带的正电荷和 负电荷相等，蛋白质以两性离子状态存在， 这时溶液的pH值，称为该蛋白质的等电点 (PI)。 在等电点时，蛋白质所带净电荷为零， 溶解度最小，蛋白质沉淀析出，利用蛋白质 的这个特点可将蛋白质提取出来。 由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪，可 用乙醇和乙醚洗涤除去。

2、酪蛋白鉴定的原理 酪蛋白中含有酪氨酸残基，酪氨酸残基 的R基团为：

含酚羟基，可与米伦试剂反应先生成白色絮状沉淀，继续反应生成红色沉淀。

酪蛋白中还含有含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸),在碱性溶液中水解后可与醋酸

铅反应生成黑色的硫化铅。

三、操作步骤

(一)酪蛋白的制备新鲜牛奶、醋酸纳缓冲液各5ml 40℃

分别加热至同样温度

上清液：保留做鉴定(烧杯)(三)2000r/min离心边加边摇混匀

5min

沉淀

加4ml95%的乙醇

离心5分钟

上清液：弃去 沉淀：做鉴定

(二)酪蛋白的性质鉴定

1、溶解度 取3支试管+ 0.1M NaOH、 0.2M HCl、 10%NaCl各2ml+少许酪蛋白→ 振荡→观察溶解快慢。2、米伦反应1ml H2O 10滴米伦试剂。加热

少许酪蛋白

观察

3、含硫氨基酸的(胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸)鉴 定： 少许酪蛋白1ml 0.1M NaOH5

溶解

5 滴5%醋酸铅加热煮沸

观察

(三)乳清中可凝固性蛋白质鉴定：将第一次离心所得的上清液徐徐加热，出现蛋白 质沉淀(球蛋白、清蛋白)。

四、实验结果 五、讨论

二、常用生化仪器使用离心机离心技术(centrifugaltechnique):根据颗粒作匀速圆周

运动时受到一个外向的离心力的行为而发展起来 的一种分离技术。 离心技术应用很广，诸如分离出化学反应后的沉淀物， 天然的生物大分子、无机物、有机物，在生物化学以及其它 的生物学领域常用来收集细胞、细胞器及生物大分子物质。

离心机种类按用途： 有分析用、制备用及分析-制备分； 按结构特点： 有管式、吊蓝式、转鼓式和碟式等；按转速： 有为常速(低速)、高速和超速三种。

实验室用普通低速离心机

实验室普通离心机使用方法1.将离心机放在坚实而平整的工作台上； 2.在适用的离心管中加入样品，必须对称配重

,否则会 损坏离心机； 3.按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入，放下 离心机顶盖； 4.检查确认调速钮处于最低速位置； 5.打开电源开关，调速到需要的转速； 6.选择工作时间，调“选时”钮到需要的位置。 7.离心完成，离心机自然停止。

2、离心机使用注意事项 (1)严禁各种液体和杂物进入离心工作室，那 样会损坏主机； (2)仪器电源线应有良好的接地，以免发生意 外； (3)离心机工作时不要打开顶盖； (4)电压的高低以及不稳定现象直接影响本机 的转速(但不会损坏电机)。对转速要求较高 的使用场合，请使用稳压装置，使运转速度稳 定。

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