马棘70%醇提取物对小鼠巨噬细胞低密度脂蛋白受体表达的影响

                作者：胡泽华，郜邦鹏，黄德斌

【摘要】  　　目的探讨马棘70％醇提取物（IPM）的抗动脉粥样硬化作用及机制。方法用不同浓度的马棘、肝素孵育体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 12 h后，加入氧化低密度脂蛋白（OX-LDL ）作用，用免疫组化和逆转录聚合链反应（RT-PCR）分别检测IPM对低密度脂蛋白受体（LDL-R）蛋白和mRNA表达的影响。结果马棘能明显降低小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的LDL-R蛋白和mRNA 表达，且对OX-LDL引起的LDL-R表达降低有保护作用。结论马棘具有降低巨噬细胞LDL-R的表达和逆转OX-LDL的作用，这可能是其抗动脉粥样硬化的重要作用机制。

【关键词】  马棘 巨噬细胞 低密度脂蛋白

　　Abstract：ObjectiveTo explore the antiatherogenic mechanism of alcohol extract from Indigofera pseudotinctoria Matsum (IPM). MethodsThe cell was incubated with different concentration of IPM or heparin for 12 h that was established by culturing mouse macmphage RAW264.7, then OX-LDL was added into culture plate. The experiment was terminated after OX-LDL took action for 24 h. The expressions of LDL-R protein and mRNA were determined by immunohistochemistry or RT-PCR, respectively. ResultsThe expression of LDL-R protein and mRNA in mouse macrophage RAW264.7 was reduced after being incubated with OX-LDL for 24 h .IPM reinforcemented the expressions of LDL-R protein and mRNA which were reduced by OX-LDL . ConclusionOX-LDL can inhibit the expression of LDL-R protein and mRNA in macrophage. IPM can reverse this effect of OX-LDL . This may be one of antiatherogenic mechanism.

　　Key words： Indigofera pseudotinctoria Matsum (IPM)；  Macrophage ；  Low density lipoprotein
   
　　马棘（Indigofera pseudotinctoria Matsum，IPM）为豆科木篮属植物，以根或全株入药。又名一味药、野绿豆、马料梢、山皂角、野篮枝子。性味苦、涩，平，具有清热解毒、消肿散结之功效。用于感冒咳嗽，扁桃体炎，颈淋巴结结核，小儿疳积，痔疮；外用治疔疮。该植物广泛分布于全国各省市，资源丰富［1～3］。我们曾研究发现马棘醇提取部位具有显著镇痛作用［4］。本研究探讨70%马棘醇提物（IPM）对小鼠巨噬细胞低密度脂蛋白受体表达的影响。

　　1  材料与方法

　　1.1  试剂与仪器

　　Gibco公司DMEN培养基和小牛血清；抗LDL-R多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）；LDL（中国协和医科大学基础生化所）；大连宝生物工程有限公司逆转录系统和PCR core system；引物（武汉博士德生物工程有限公司）；小鼠单核巨噬细胞RAW264.7（中国协和医科大学细胞中心）；其他试剂为国产分析纯。上海第三分析仪器厂722 型分光光度计；日本 Olympus 公司XDP-1倒置显微镜；SHELDON LAB 公司TC 2323 型CO2 培养箱；依地酸（EDTA，sigma公司），3,3二氨基联苯胺（DAB）。

　　1.2　马棘醇提取物的制备［5］

　　马棘枝叶采自湖北建始，经湖北民族学院鲁开功教授鉴定为豆科植物马棘（Indigofera Pseudotinctoria Matsum，IPM），经10倍量70%乙醇回流提取两次，过滤，浓缩蒸干，研末，收率为14.3%。

　　1.3  小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的培养［6，7］

　　细胞培养瓶中接种RAW 264.7，调至pH 7.2～7.4，含胎牛血清10％、链霉素l×105 U·L-1、青霉素1×108 U·L-1的DMEN培养液，通以5 % CO2恒温37℃培养48～72 h，细胞融合后，用0.1％胰蛋白酶和EDTA0.08 %的混合消化液消化传代。实验前将细胞接种于细胞培养板，在无血清、无酚红的培养液中通以5 % CO2，37℃，培养12 h备用。

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