基于 Q-Marker 理论的化学标识物研究及应用

摘要:目的探寻一种新的中药质量控制研究模式，为中药质量控制和研究提供新的思路和视角，提升中药产品质量，促进中药产业健康发展。方法在刘昌孝院士提出的中药质量标志物(Q-Marker)理论体系下，提出化学标识物概念，寻找来源某药材(饮片)特有的而不是来源于其他药材的化学物质作为化学标识物，用于中药的真伪鉴别以及质量控制。结果与讨论分别以白薇、阿胶、皂矾作为植物药、动物药、矿物药的代表，进行了正伪品的化学标识物研究，并将其应用于女金丸、乙肝解毒胶囊等制剂中，在国家药品评价性抽验中发挥了重大的作用。

　　关键词:中药;质量控制;质量标志物;化学标识物

　　近年来，由于中药材品质的影响，国内外业界对中医药的安全性和有效性提出诸多质疑，“品质退化”、“中医将毁于中药”等说法频繁见于各种报道，中药质量成为行业关注的焦点，严重影响了中医药的声誉，也一定程度上影响了国人对中医药的“自信心”。中药质量是对中药有效性和安全性的反映和表征，是中医临床用药和中成药有效性控制的重要依据。近些年来，我国中药科技工作者为中药质量控制做了大量的工作［1-12］，我国中药质量控制水平也有了长足的进步，但现行质量标准仍存在诸多问题，难以客观评价和有效控制中药质量。

　　基于中药质量的复杂性及质量标准的片面性，刘昌孝院士针对中药生物属性、制造过程及配伍理论等自身医药体系的特点，于2016年提出中药质量标志物(Q-marker)的新概念［13-21］。中药质量标志物是存在于中药材和中药产品(如中药饮片、中药煎剂、中药提取物、中成药制剂)中固有的或加工制备过程中形成的、与中药的功能属性密切相关的化学物质。中药质量标志物是中药质量标准中的核心要素是质量标准能否控制中药材、饮片、提取物及制剂内在质量的关键。中药质量标志物的基本条件:①存在于中药材和中药产品中固有的次生代谢物，或加工制备过程中形成的化学物质;②来源某药材(饮片)特有的而不是来源于其他药材的化学物质;③有明确的化学结构和生物活性;④可以进行定性鉴别和定量测定的物质;⑤按中医配伍组成的方剂“君”药首选原则，兼顾“臣、佐、使”药的代表性物质。

　　Q-Marker是在现代科学技术条件下提出的新概念，也为中药质量控制提出了新的要求。但是中药Q-Marker的基本要求较高，不仅需要深入的药效物质基础研究，而且要求该次级代谢产物具有专属性和生物活性，同时还应有较好的色谱行为，因此中药Q-Marker需要一个系统性研究来支撑。在Q-Marker理论体系下，提出化学标识物的概念，以Q-Marker的基本条件②:寻找来源某药材(饮片)特有的而不是来源于其他药材的化学物质作为化学标识物，利用其较强的专属性和单一性，用于药材的正伪品鉴别，以及外形被破坏的提取物、配方颗粒以及中成药制剂中部分药材是否存在掺伪造假问题。

　　1基本体系的建立

　　目前，在真伪鉴别方面，中药材主要采用性状、显微、理化等方法，鉴别依据多基于分类群的性状特征分析，存在一定的局限性，尤其在中成药的应用中受到很大的限制。随着现代科学技术的发展，色谱、波谱、分子生物学技术及多维联用技术不断渗透到中药鉴定领域［22-27］。综合多种分析技术，初步建立了化学标识物研究的基础体系(图1)，用于判断中药是否存在掺伪造假问题。

　　在传统的中药鉴定中，粉末显微鉴别是一种重要工具，被广泛地应用于《中国药典》一部，可有效用于药材真伪的辨别。但是粉末显微鉴别方法存在一定的局限性，首先对于来源于相同科属的植物，显微特征容易存在差异不显著问题;其次，对于提取过的中药材，几乎观察不到有效的显微特征，而化学标识物则可以解决上述两个问题，广泛用于中药的真伪鉴别以及掺伪造假研究。

　　2中药材化学标识物的研究

　　从来源进行分类，中药分为植物药、动物药和矿物药。笔者分别以白薇、阿胶、皂矾为例，对植物药、动物药和矿物药进行了化学标识物研究。

　　2.1白薇正伪品的化学标识物研究

　　2.1.1仪器及材料Leica DM2500显微镜(德国徕卡公司);岛津LC－20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)，二极管阵列检测器;LC-MS-IT-TOF液相色谱-质谱联用仪(日本岛津公司);Mettler AE240电子天平(瑞士梅特勒公司)。白薇及老瓜头药材为安徽亳州及河北保定药材市场收集，均经过济南市食品药品检验检测中心宋西贵主任药师鉴定。

　　2.1.2基原鉴定白薇为萝藦科植物白薇(Cynanchum atratum Bge．)或蔓生白薇(Cynanchum versicolor Bge．)的干燥根和根茎，目前市场上萝藦科植物老瓜头(Cynanchum komarovii Al．Iljinski)代替、冒充白薇现象普遍。白薇和老瓜头性状外观相似，结合显微、基因测序进行了基原鉴定，对药材进行了正伪品区分。

　　2.1.3化学标识物的确定测定条件:Kromasil 100-5 C18(4.6 mm×250 mm，5μm)色谱柱;以乙腈为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱(0～7 min，10%A;7～20 min，10%A→15%A;20～35 min，15%A→23%A;35～50 min，23%A→30%A);体积流量1 mL·min－1;检测波长280 nm;柱温35℃。进样量为10μL。

　　供试品溶液的制备:取供试品粉末0.4 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，滤过，取续滤液，即得。

　　测定:采用液相色谱法，分别建立白薇和老瓜头的指纹图谱(图2)，对二者的化学成分进行分析。通过多批次样品的分析检测，结合质谱数据，初步确定1号峰成分作为化学标识物。通过分离、制备等手段获得该物质，并采用核磁、质谱等分析技术对该成分进行结构确认，最终确定该成分为β-D-呋喃果糖基-(2→1)-α-D-［6-O-芥子酰基］-吡喃葡萄糖苷。

　　2.2阿胶正伪品的化学标识物研究

　　阿胶为马科动物驴(Equus asinus L．)的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。由于物种特性，驴成熟周期长，交配频率低，产仔率低，使得存栏量低，从而导致皮料供应远远满足不了市场需求。利益驱动和供需矛盾导致阿胶生产环境乱象丛生，普遍存在不同物种的皮源混用，甚至以工业皮下脚料进行生产的问题［28］。

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