壁虎不同提取工艺成分抗肿瘤作用的研究

                 作者：李钦青，孙明江，代龙，孔令提

【摘要】  目的比较壁虎不同提取工艺成分对S180和H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫器官的影响。方法以肉瘤S180、肝癌H22荷瘤小鼠作为动物模型，以抑瘤率及胸腺、脾脏指数为指标比较壁虎原粉及水煎煮、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解等不同工艺成分的抗肿瘤作用。结果3种酶解工艺成分对肉瘤S180和H22肝癌抑瘤率均明显高于原粉与水煎煮液，相比模型组有显著性差异(P<0.05)，但对荷瘤小鼠的胸腺指数、脾脏指数无明显影响。结论壁虎酶解工艺成分对S180、H22荷瘤小鼠均有明显抗肿瘤作用。

【关键词】  壁虎; 酶解; 抗肿瘤; S180; H22

　壁虎，别名守宫、壁虎、蝎虎、天龙，味咸性寒，功能祛风，定惊，散结，解毒。壁虎作为药材始见于《本草经集注》，而《本草纲目》就称其能治“瘰疬初起……血积成痞，反胃膈气，痈疮大痛”。 其可入血分透筋达络，既善破血散结解毒，又能通经活络而止痛。随着壁虎多种药理活性，特别是抗肿瘤活性被发现后[1]， 人们对壁虎的关注度日益提高。目前壁虎临床一般以原粉、水煎煮等方法应用，存在服用量大、易被微生物污染等缺点。现代药理研究表明，动物类药材发挥作用的主要为其小分子肽[2～4]，因此，我们拟采用酶解方法得到其小分子肽，并与常规原粉和水煎煮液比较其抗肿瘤作用的差异。

　　1 材料

　　1.1 动物昆明种小鼠，雄性，体质量(20±2)g，购自山东中医药大学实验动物中心，动物许可证号为：SCXK(鲁)20050015。S180腹水小鼠和H22肝癌小鼠均购自山东省医学科学院。

　　1.2 仪器JJ-2型组织捣碎机，江苏江南仪器厂;摇摆式高速中药粉碎机，浙江大德中药器械有限公司;W-O型恒温水浴锅,上海申顺生物科技有限公司，TDL-5飞鸽牌离心机，上海安亭科学仪器厂;小型切向流超滤系统，美国Millipore公司(密理博)。

　　1.3 试剂及药品胃蛋白酶(酶活力>1 200 U/g)，胰蛋白酶(酪蛋白转化力≥25.0)，均购自国药基团化学试剂有限公司，注射用环磷酰胺，200 mg/支，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：08051354，氟尿嘧啶注射液(5-Fu)，上海旭东海普药业有限公司，批号:080302。壁虎购自济南兴旺蟾业，经本校周风琴教授鉴定系壁虎科动物无蹼壁虎Gekko swinhonis Gunther的干燥全体，置干燥箱60℃以下真空干燥，粉碎，过80目筛，细粉备用。

　　2 方法

　　2.1 供试品溶液的制备

　　2.1.1 原粉液的制备取壁虎细粉，用0.2%羧甲基纤维素将其稀释成1 ml∶0.5 g的混悬液，备用。

　　2.1.2 水煎煮提取液的制备取壁虎细粉，加8倍量水煮沸煮沸60 min，离心，残渣加8倍量水煮沸30 min，离心，合并上清液，浓缩至1:0.5(每毫升药液相当于0.5 g药材，下同)，即得水煎煮提取液。

　　2.1.3 胃蛋白酶酶解液的制备[5]取壁虎细粉90 g，置于组织捣碎器中，加入5倍量水，匀浆(10 000 r/min)10 min，等分为3份，取1份，煮沸15 min，放冷，调节pH 2.0，移至37 ℃恒温水浴锅中，保温10 min，加入1%胃蛋白酶，2 h后取出，离心(4 000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 μm)，超滤(相对分子质量3 000)，收集相对分子质量小于3 000部分，浓缩至1∶0.5，即得胃蛋白酶酶解液。

　　2.1.4 胰蛋白酶酶解液的制备[6]取“2.1.3”项下一份样品液，煮沸15 min，放冷，调节pH 7.5，移至55 ℃恒温水浴锅中，保温10 min，加入1%胰蛋白酶，3 h后取出，离心(4 000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 μm)，超滤(相对分子质量3 000)，收集相对分子质量小于3 000部分，浓缩至1∶0.5，即得胰蛋白酶酶解液。

百度搜索“yundocx”或“云文档网”即可找到本站免费阅读全部范文。收藏本站方便下次阅读，云文档网，提供经典医药类壁虎不同提取工艺成分抗肿瘤作用的研究在线全文阅读。