大孔吸附树脂分离纯化龙须藤总黄酮的工艺研究

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作者：徐伟，张淑玲，洪振丰，郑海音

【摘要】 　　目的研究AB8大孔树脂分离纯化龙须藤黄酮的工艺条件。方法通过静态吸附解吸附实验筛选最佳大孔树脂，并以总黄酮含量为考核指标，采用L9（34）正交试验法对影响AB8大孔树脂分离纯化龙须藤黄酮的因素进行考察，确定最佳工艺条件。结果最佳工艺条件为：采用AB8型大孔树脂，取龙须藤黄酮提取液(含生药0.5 g/mL)上样，树脂用量为4倍生药量，洗脱剂采用体积分数50％乙醇，用量为16倍生药量。结论该工艺条件科学合理，可有效地用于龙须藤黄酮的分离富集。

【关键词】 龙须藤大孔树脂正交设计法总黄酮
　　Abstract:Objective To optimize the separation and purification procedure of total flavonoids from Bauhinia championii Benth by AB8 macroporus resin. Methods The yield of total flavonoids was used as a maker. The static and dynamic adsorption/desorption methods and orthogonal design L9（34）were used to evaluate factors such as concentration of alcohol，ratio of alcohol to raw material and ratio of resin to raw material. The content of total flavonoids was determined by UVVis spectrophotometer. Results The optimum conditions were as following: ratio of resin to raw material was 4, 50% of alcohol was used for eluent, ratio of alcohol to raw material was 16. Conclusion This procedure is reasonable, which could be used to separate and purify the total flavonoids from Bauhinia championii Benth.

　　Key words:Bauhinia championii Benth；macroporus resin；orthogonal test；total flavonoids

　　龙须藤 (Bauhinia championii Benth.)为双子叶植物豆科羊蹄甲属植物多年生藤，具有祛风湿、行血气的功效。文献研究表明龙须藤具有镇痛抗炎、抗风湿骨痛、抗血小板凝集等药理作用，主要含有黄酮、氰苷、没食子酸等成分［1］。其中黄酮类是主要有效成分，具有较强的镇痛抗炎［2］、抗血小板凝集［3］等活性。大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，兼具吸附和分子筛分离原理，对有机化合物具有良好的吸附分离性能。本文采用静态吸附解吸实验，筛选最佳大孔树脂，利用正交试验法对大孔树脂分离纯化龙须藤黄酮的主要影响因素进行考察，优化树脂分离工艺参数，为开发利用龙须藤黄酮提供实验依据。

　　1 仪器与试药
　　
　　WFZ800D3B紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)；KQ2500B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，BS200S电子天平（赛多利斯公司）。龙须藤采集于福建永泰县青云山地区，由福建中医学院药学系鉴定为豆科羊蹄甲属植物龙须藤(Bauhinia championii Benth.)的藤。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号100080200306)，其他试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 龙须藤黄酮的提取［4］

　　取粉碎过筛的龙须藤药材适量，加10倍(生药量)的体积分数60％乙醇浸泡3 h，回流提取3次，每次2 h，过滤，合并滤液，回收至无醇味，加水溶解至每1 mL含0.5 g生药，离心(4 000 r/min )15 min，过滤，备用。测得总黄酮质量分数为6.91％。

　　2.2 总黄酮含量测定［4］

　　2.2.1 标准曲线绘制精密称取干燥至恒重的芦丁对照品23.0 mg,置50 mL量瓶中，加体积分数95%乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置25 mL量瓶中，加水至6.0 mL；加入5% NaNO2溶液1.0 mL，使混匀，放置6 min；加入10% Al(NO3)3 1.0 mL，摇匀，放置6 min；再加入4％NaOH溶液10.0 mL，加水至刻度，摇匀，放置15 min，于500 nm波长处测定吸光度。以吸光度（A）对质量浓度(ρ)进行线性回归，得回归方程：A=0.0055ρ+0.024,r=0.999 87，表明芦丁对照品质量浓度在18.40～110.4 μg/mL范围内线性关系良好。

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