1.2 动物及分组SD大鼠称重后，空白对照组腹腔注射生理盐水30 mg/kg，其他组腹腔注射20%百草枯溶液30 mg/kg复制百草枯急性中毒模型。动物分组如下：①空白对照组(NS)：腹腔注射生理盐水4 mg/kg；②阴性对照组(PQ)：腹腔注射生理盐水4 mg/kg；③阳性对照组(D)：腹腔注射地塞米松0.5 mg/kg；④生脉低剂量组(LDG)：腹腔注射生脉注射液0.2 ml/kg；⑤生脉高剂量组(HDG)：腹腔注射生脉注射液0.4 ml/kg。以上5组动物均给药2次/d，连续给药3 d。
1.3 标本的收集与处理用水合氯醛麻醉大鼠后开胸暴露出气管和双肺，腹主动脉取血处死，留取血清；并立即取出肺组织备用。
1.4 NO测定精密称取一定量的肺组织，在持续95% (体积分数)O2-5% (体积分数)CO2，37℃恒温条件下振荡孵育2 h，取孵育液100 μl，按试剂盒说明严格操作。
1.5 肺组织iNOS活性的测定速取肺组织适量，按1∶5(W/V)加入预冷的提取液，冰浴中匀浆，4℃，3 000 r/min离心10 min，收集上清液，用考马斯亮蓝试剂盒进行蛋白定量，iNOS试剂盒测定提取液iNOS活性。
1.6 肺组织NF-κB p65的测定采用免疫组化链霉亲和素-生物素标记（LSAB）法进行染色，观察NF-κB p65在大鼠肺组织中的表达和分布情况。一抗选用兔抗鼠NF-κB p65多克隆抗体，稀释度为1∶100，用SP试剂盒，按说明书依次进行操作。镜下随机选取5个高倍视野，计算5个高倍视野中阳性细胞（以胞膜/胞浆/胞核出现棕黄色着色颗粒为阳性标记）占细胞总数的百分比。
1.7 组织学检查取少许肺组织，经10%甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色后用显微镜观察肺组织损伤情况。
1.8 统计学处理实验资料以±s表示。两组以上资料采用One-way ANOVA分析、组间Newman-Student-Keuls检验进行统计学处理；两组资料采用Student's t test处理。P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肺组织NO和iNOS的变化研究结果表明,PQ组肺组织NO浓度和iNOS活性明显高于NS组(P＜0.01），说明百草枯可引起肺组织产生大量NO，并使肺组织iNOS活性增高。应用生脉、地塞米松进行干预治疗后，其肺组织NO浓度和iNOS活性较PQ组明显降低(P＜0.01，P＜0.05），因此生脉可抑制肺组织产生NO并抑制iNOS活性，而且低剂量生脉效果更佳。结果见表1及图1～2。表1 肺组织中NO，iNOS含量的变化（略）
2.2 肺组织中NF-κB p65表达的变化研究结果表明，NS组大鼠肺组织中NF-κB p65不表达或有很弱的表达，而PQ组大鼠NF-κB p65有过强表达，二者比较有显著性差异（P＜0.01），说明百草枯中毒可导致肺组织中NF-κB p65的过表达；与PQ组相比，D组和HDG组大鼠NF-κB p65表达稍有降低，但是无统计学意义（P＞0.05）；而LDG组大鼠NF-κB p65表达明显降低，二者比较有显著性差异（P＜0.01）。结果见表2及图3。表2 肺组织中核因子-κB p65表达的变化（略）与PQ组比较，**P＜0.01；n=103 讨论
核因子-кB（NF-кB）的激活与肺损伤和肺间质纤维化有密切关系［4,5］。一方面，NF-кB活化后可使宿主细胞细胞因子的基因转录增加，并激活其它细胞合成IL-6、IL-8等因子，形成一个NF-кB与细胞因子网络之间的正反馈圈，放大炎症反应，使肺损伤进一步加重;另一方面，NF-кB基因调控范围十分广范，除上述的前炎症因子外，还参与了一氧化氮合成酶（iNOS）的基因转录，对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的基因转录均有调控作用，使肺内NO含量增加，后者作为自由基成分加重肺损伤［6］。而这些因素也均参与PQ中毒肺损伤的发生。因此，抑制自由基产生及NF-кB活化的措施可能是治疗百草枯中毒的一个较好途径。
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