卵母细胞胞浆内单精子注射成功妊娠1例
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作者：姚志伟 王雁林 荣抗美 张冬梅 何秀香 孟丽芳
【关键词】 辅助生殖；显微授精；单精子注射
卵母细胞胞浆内单精子注射（ICSI） 俗称第二代试管婴儿，是目前最先进的辅助生殖技术。方法为使用显微操作技术将精子注射到卵细胞浆内，体外培养到早期胚胎，再放回母亲子宫内发育着床。主要用于治疗严重的少精、弱精、畸精和不明原因的不孕症，是目前治疗男性不育的最有效的方法。2008年初，我院生殖中心开展了这项技术，5月初治疗了第一例患者并使其成功受孕，这也是鲁北地区首例经ICSI治疗获得妊娠的患者，现介绍如下。
1 临床资料
1.1 一般资料 接受治疗的夫妇男方32岁，女方31岁，婚后8年未孕。经检查男方患严重的少精症并伴弱精、畸精，精子密度0.73×106/ml，活率25%；活力：a级0%，b级25%，c级0%，d级75%；畸形精子＞90%。双方染色体检查均正常。
1.2 方法
1.2.1 控制性超排卵：采用常规体外受精胚胎移植（IVFET）超排卵方案，HCG注射36 h后经阴道超声引导下取卵，共获卵15枚。
1.2.2 精子准备:嘱男方取卵前3 d不排精，取卵后即取精，采用直接洗涤离心法处理精液。方法为将精液与等量的含10%血清代用品（SSS）的人输卵管液（HTF）培养液混合，1 000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀加HTF(含10%SSS) 培养液0.5 ml混合，置于5％的CO2 培养箱中备用。
1.2.3 卵母细胞处理：取出的卵子在HTF(含10%SSS)培养液中培养4 h后，每5颗一组依次放入按说明稀释好的透明质酸酶（HYASETM10X Vitrolife）液中消化卵丘，去卵丘后共得含有第一极体的成熟卵母细胞12枚进行ICSI受精。 1.2.4 显微操作：采用ZEISS AXIOVEVT 200倒置显微镜和Eppendorf电动步进显微操作仪。显微固定针和注射针采用Humagen MPHMED35、MIC3535。显微注射前先准备一个Falcon1006培养皿，在皿中央加一个10 μl PVP(ICSITM Vitrolife)微滴，再取备好的精子混悬液5 μl加在PVP的边缘形成交接面，利于精子游入PVP。在皿周围环绕PVP用HTFHEPES培养液做4个5 μl微滴，加矿物油覆盖。将卵子移入HTFHEPES培养液滴中，1枚/滴。用显微注射针制动精子尾部，确认精子被制动后吸入精子。用显微固定针固定卵子，使第一极体位于6／12点时钟方位，吸入精子的显微注射针从3点时钟方位进入卵细胞浆内并回吸胞浆，见凹陷的卵膜有回弹现象时，说明已刺入胞浆内，即注射精子入胞浆内。退出显微注射针，并检查卵子形态是否正常。将已注射后的卵子移入HTF(含10%SSS)培养液中，置37℃、5％的CO2培养箱中培养24 h后，将胚胎再放入IVCONE(含15%SSS)培养液中至胚胎移植。
1.2.5 观察受精和评判胚胎质量:显微受精16 h后观察受精情况，12颗卵有8颗受精，均为2 个细胞核。受精卵继续培养至72 h，按Brian Dale方法评判胚胎质量：1～2级为优质胚胎，3级为可移植胚胎，4级为劣质胚胎（胚胎碎片＞50%不适合移植）。评定2级胚胎1枚，3级胚胎1枚，4级胚胎6枚。
1.2.6 胚胎移植:取卵后72 h，将上述2、3级胚胎各一枚移入患者宫腔，移植过程顺利。
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